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肉制品胭脂紅著色劑的測(cè)定

更新時(shí)間:2017-11-06 點(diǎn)擊次數(shù):3709

1、適用范圍

    適用于肉制品中胭脂紅著色劑的測(cè)定。
2、提取步驟

試劑的配置:

1)硫酸溶液:1+9體積比;

2)鎢酸鈉溶液:C=100g/L;

3)無(wú)水乙醇+氨水+水=7+2+1;

4)檸檬酸溶液:C=200g/L;

4)pH=5的水,取100mL的水,用檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至pH值=5.

提取過(guò)程:
    
稱取試樣10 g,均質(zhì)器均質(zhì)1min,然后加入20 mL石油醚提取脂肪,超聲5 min,靜止沉降2 min后棄去石油醚,重復(fù)3次。吹干后加入10 mL提取液(無(wú)水乙醇+氨水+水=7+2+1)提取胭脂紅,邊攪拌邊過(guò)濾(用30mL帶篩板的固相萃取空柱管進(jìn)行過(guò)濾),重復(fù)提取3-5次,收集全部的提取液。70 oC水浴旋蒸至10mL以下,加入1mL硫酸溶液和1mL鎢酸鈉溶液,繼續(xù)70o

 

注意:1)提取胭脂紅需多次提取,確保提取*;

2)提取胭脂紅的過(guò)程中不能用濾紙過(guò)濾,因?yàn)闉V紙會(huì)極大程度的吸附胭脂紅色素;

      3)本解決方案創(chuàng)新性的以SPE空柱管作為過(guò)濾提取后的肉制品的裝置,相比其他的過(guò)濾裝置更為;

      4)提取胭脂紅后所得的樣品溶液,加入硫酸溶液和鎢酸鈉溶液沉淀蛋白后,需要用純水洗滌蛋白殘?jiān)?,這樣可以有效的提取吸附在蛋白殘?jiān)械碾僦t;

      5)本實(shí)驗(yàn)的加標(biāo)回收率是將肉制品去除脂肪后,再加入胭脂紅進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。

 

3、聚酰胺SPE柱凈化步驟凈化:

 

SPE柱:Welchrom®PA(1g/6mL)

活化:6mL純水;

上樣:將提取步驟處理好的樣品溶液過(guò)Welchrom®聚酰胺固相萃取柱,棄去上樣流出液;

淋洗:6mL pH=5的水,6mL甲醇+加酸(6+4),12mL純水洗至中性;

洗脫:6mL無(wú)水乙醇+氨水+水(7+2+1),收集洗脫液。

濃縮:將收集的洗脫液旋蒸至近干,加水定容至10ml,過(guò)水膜上機(jī)測(cè)定。

標(biāo)樣配置:1 mg./ml胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液,取50 µl并用水定容至10 mL

注:濃縮后的溶液應(yīng)用水系濾膜過(guò)濾,不能用有機(jī)系濾膜,因?yàn)橛袡C(jī)系濾膜容易吸附胭脂紅,從而損失回收率。 
4、色譜條件:
色譜柱:月旭Ultimtae®XB-C18,4.6×150,5µm;

流動(dòng)相:甲醇:0.02 mM乙酸銨溶液,梯度洗脫;

流速:1.0 mL/min;

柱溫:30 ℃

檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm;

進(jìn)樣量:20 µL
表1:液相色譜梯度洗脫條件

 

時(shí)間/min

甲醇/%

0.02mM乙酸銨溶液/%

0

22

78

5

35

65

20

85

15

21

22

78

25

22

78

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