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問君幾多愁,恰似一支氨基柱超難留!

更新時間:2019-07-08 點擊次數:4590

 

當您使用氨基柱時,有沒有遇到在使用一段時間之后,柱效下降、柱壓升高,使得檢測結果逐漸達不到要求?或者柱子在使用過程中出現異常干擾峰,或者保留時間出現漂移,與之前的檢測結果有較大偏差?又或者是柱子的專一選擇性,使得在特定色譜條件下方法得不到重現,分離度、柱效和拖尾因子達不到檢測要求?由于氨基柱的*性,進而使用問題較多,這給我們帶來了很多的困擾,那么今天就來談談氨基柱。

氨基柱的鍵合官能團是氨丙基,這種官能團比常規(guī)的C18、C8和C4易水解,所以在使用氨基柱之前,我們就要做好心理準備,氨基柱的使用壽命比常規(guī)色譜柱要短很多。

 

氨基柱既可以做正相,也可以反相使用,而這兩相溶劑是不能互溶的,所以如果在正反相進行切換使用時,需要用異丙醇進行過渡。下面將分別談談氨基柱在正反兩相中的使用與維護注意事項。

 

反 相

?反相使用時,如果流動相不含有酸堿鹽,做樣結束直接用100%的乙腈進行沖洗和保存即可。若含有酸堿鹽,首先用60%的乙腈水沖洗40min,然后再用100%的乙腈沖洗和保存;

?反相使用時,注意流動相的pH范圍,pH越低越容易水解,理想的pH范圍是3-7,流動相中水的比例越高,也越容易水解。

PS:柱子使用后,沖洗后建議保存在純的有機相中,這樣能獲得良好的保存效果以及延長柱子的使用壽命。此外如柱子出現了柱壓升高,峰形異常,柱效和分離度下降等異常情況后,可以先用過渡流動相沖掉色譜柱的鹽,再分別以做樣流速用100%乙腈→100%甲醇→100%異丙醇→100%乙腈進行沖洗,每項沖洗30分鐘,其中異丙醇由于黏度大,所以需要降低流速。

 

正 相

柱子的沖洗使用100%的正己烷,然后使用正己烷/異丙醇(90/10)進行保存。

此外,正相色譜中,固定相的水分含量是影響選擇性的關鍵參數,而流動相存在的水分含量會影響到保留時間和分離度,所以出現保留時間波動較大,可以歸因于固定相和流動相中水分的變化,建議對氨基柱進行除水:

?去除固定相中的水分:

用含2.5%二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30倍柱體積;

?使用水分含量可控的流動相(比如水半飽和):

半飽和流動相配置:將無水的非極性流動相分成兩半,其中一半中加入一定量水,并混勻攪拌約1小時,靜止分層后,將多余的水相全部除去,將兩部分重新混合在一起就配成了“半飽和”流動相。

PS:如果出現柱壓升高、分離度和柱效下降等異常情況,建議用100%異丙醇→100%甲醇→100%異丙醇以分析流速分別沖洗,每項沖洗40分鐘。同樣,異丙醇沖洗時需降低流速。

 

乳糖專用柱

月旭還有一款特殊氨基柱,乳糖專用柱 Xtimate®Lactose-NH2,我們建議采用純乙腈進行沖洗和保存,如果柱壓升高,分離度和柱效下降等異常情況,可以用純甲醇→純乙腈→純異丙醇→純乙腈分別進行沖洗,每項3小時。

 

在使用乳糖專用柱檢測時,如果出現噪音增加、漂移增大、分離度達不到或者柱效不夠等異常情況,需要注意以下幾點:

?流動相混合在一起,充分搖勻,真空抽濾,超聲脫氣10分鐘,使用一個通道運行,不要使用在線過濾器;

?進樣體積需要嚴格按照藥典要求,進樣10μL,盡可能地將定量環(huán)更換成10μL定量環(huán),減小柱外死體積的影響,下面左圖和右圖分別是進樣20μL和進樣量10μL的色譜圖,對比非常明顯;

      

?由于示差檢測器對溫度的變化比較敏感,建議將柱溫箱用干毛巾或者干的棉花填充,充當傳熱介質,使得有更好的基線噪音和色譜效果。

 

由于氨基鍵合官能團*的極性,易水解,導致氨基柱的使用壽命較其它常規(guī)色譜柱要短,所以我們需要認清這個事實。希望以上的使用和維護方法可以幫到您,極大地延長氨基柱的壽命。

 

 

 

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