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SPE凈化模式介紹

更新時(shí)間:2019-07-08 點(diǎn)擊次數(shù):5488

固相萃?。⊿olid Phase Extraction,簡(jiǎn)稱SPE),也稱固相提取,是一項(xiàng)結(jié)合了選擇性保留、選擇性洗脫等過(guò)程的分離技術(shù)。 SPE也是一個(gè)柱色譜分離過(guò)程,分離機(jī)理、固定相和溶劑的選擇等方面與液相色譜(HPLC)有許多相似之處。

SPE是一種吸附劑萃取,樣品通過(guò)填充吸附劑的一次性萃取柱,分析物和雜質(zhì)被保留在柱上,然后分別用選擇性溶劑去除雜質(zhì),洗脫出分析物,從而達(dá)到分離的目的。

SPE的凈化模式主要取決于填充劑的類型和溶劑的性質(zhì),有以下2種:

 

 

模式一:保留目標(biāo)物,去除雜質(zhì)

固相萃取操作一般有四步(見(jiàn)下圖1):

1)活化--除去小柱內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境(注意整個(gè)過(guò)程不要使小柱干涸)。

2)上樣--將樣品用一定的溶劑溶解,轉(zhuǎn)移入柱并使組分保留在柱上(注意流速不要過(guò)快,以1ml/min 為宜,大不超過(guò)5ml/min)。

3)淋洗--da程度除去干擾物(建議此過(guò)程結(jié)束后把小柱*抽干)。

4)洗脫--用小體積的溶劑將被測(cè)物質(zhì)洗脫下來(lái)并收集(注意流速不要過(guò)快,以1ml/min為宜)。

 

圖1.保留目標(biāo)物凈化模式

 

絕大多數(shù)的樣品都是用保留目標(biāo)物的模式凈化的,下面舉個(gè)例子:

 

食品中乙二胺四乙酸二鈉的檢測(cè),樣品經(jīng)提取,絡(luò)合后,凈化;

SPE柱:月旭 Welchrom®SAX 150mg/6mL;

活化:5 mL 甲醇、5 mL 水,棄去;

上樣:待凈化液全部上樣,控制流速,不宜過(guò)快,棄去;

淋洗:依次用5mL水,5mL甲醇淋洗,抽干;

洗脫:5mL5%甲酸甲醇水洗脫,抽干,收集洗脫液定容至5mL,過(guò)0.22μm濾膜,供液相色譜儀測(cè)定。

 

圖2、八寶粥樣加標(biāo)150mg/kg過(guò)柱圖譜

 

模式二:保留雜質(zhì)

固相萃取操作一般有三步(見(jiàn)圖2):

 

1)、活化--除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境(注意整個(gè)過(guò)程不要使小柱干涸)。

2)、上樣--將樣品轉(zhuǎn)移入柱,此時(shí)大部分目標(biāo)化合物會(huì)隨樣品基液流出,雜質(zhì)被保留在柱上,故此步驟要開(kāi)始收集(注意流速不要過(guò)快)。

3)、洗脫---用小體積的溶劑將組分淋洗下來(lái)并收集,合并收集液(注意流速不要過(guò)快).

 

圖3.保留雜質(zhì)凈化模式

 

這種凈化模式多用于食品或農(nóng)殘的檢測(cè),下面舉個(gè)例子:

 

食品中丙烯酰胺的檢測(cè),樣品經(jīng)提后,凈化;

SPE柱:月旭Welchrom® C18E 500 mg/6mL;

活化:5mL甲醇,5mL水;

上樣:待凈化液,收集;

洗脫:2mL30%甲醇分次潤(rùn)洗燒瓶,再上樣,收集,抽干;

合并上樣液和洗脫液,并用30%甲醇水定容至5mL,并過(guò)0.22 µm濾膜,上HPLC檢測(cè)。

圖4.咖啡樣品加標(biāo)10mg/kg

 

 

 

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