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緩沖鹽的這些“陷阱”你中招了嗎?

更新時(shí)間:2022-11-07 點(diǎn)擊次數(shù):1105

在色譜分析過程中常常需要使用緩沖鹽來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值,緩沖鹽的不當(dāng)使用對(duì)色譜柱可能造成柱壓升高、柱效下降以及使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化等影響。


柱壓升高

原因:緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出,堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙,阻礙流動(dòng)相傳質(zhì),引起柱壓升高;

相同化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化

原因:如果沒有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣,色譜柱內(nèi)含有的鹽會(huì)使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化;

柱效下降

原因:

1)有些緩沖鹽會(huì)滲入到鍵合相的深處,損害硅膠基體,導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失,柱床變松,柱效下降;

2)凝結(jié)在鍵合相表面,使C18碳鏈難以舒展,對(duì)物質(zhì)的保留能力下降,導(dǎo)致柱效下降。因此用過緩沖鹽后需要對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗,水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應(yīng)特別引起注意。

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那么如何正確使用緩沖鹽呢?

使用前的處理:在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱,直至基線平穩(wěn)。原則上,用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同(或含水更多),不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí))流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí),如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對(duì)較小,不先沖洗掉,接下來做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大,而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí),緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出,沉積下來,這將可能導(dǎo)致上述對(duì)色譜柱的損害。

使用后的處理:用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析用流動(dòng)相wei一的區(qū)別是,用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min,直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)不使用,要長(zhǎng)期保存,則需再加上一步,即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍,直至基線平穩(wěn)。

使用緩沖液要注意幾點(diǎn)

01

避免使用鹽酸鹽,鹽酸鹽對(duì)鋼質(zhì)有腐蝕作用。

02

緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液,緩沖液最好要現(xiàn)配現(xiàn)用。

03

實(shí)驗(yàn)后不可用有機(jī)溶劑直接過度,有機(jī)溶劑會(huì)處使鹽類析出,造成液路或色譜柱堵塞。

04

使用緩沖液要及時(shí)掌握pH范圍,做到胸中有數(shù)。

05

清洗液路和柱子時(shí),有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。

06

長(zhǎng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出,若有白色鹽類析出,可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路(拆下柱子,走30mL,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞。

07

選擇緩沖液要用可靠的試劑,避免不純的鹽類造成不必要的麻煩。

如果流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例很高是不能用來沖洗緩沖鹽的,是洗不出來的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇沖洗,是可以把緩沖鹽沖洗出來的,然后用純的有機(jī)溶劑來保護(hù)柱子。Z 好的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換,一般在15分鐘以內(nèi)最好,且用0.8的流速較好。如果用純水沖,容易造成鍵合的碳鏈的流失,最好用5%~10%甲醇水溶液沖??梢杂眉兯媪鲃?dòng)相中的緩沖液,有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。

小結(jié)

正確使用緩沖鹽很有必要,既可以防止緩沖鹽析出,也可以達(dá)到提高色譜柱使用壽命的目的。我們不妨用一句話來總結(jié)它的使用方法:用前要過濾,用后需沖洗。



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