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高效液相色譜中溶劑與檢測(cè)器的兼容性

更新時(shí)間:2023-01-12 點(diǎn)擊次數(shù):1162

在高效液相色譜中,溶劑是指用于制備流動(dòng)相、溶解和輸送樣品的溶液。流動(dòng)相是影響HPLC的性能的主要因素,它的性質(zhì)必須滿足HPLC測(cè)試的嚴(yán)格要求。在選擇溶解樣品的溶劑和其他與制備樣品有關(guān)的溶劑時(shí),同樣也需考慮這些溶劑的性質(zhì)與檢測(cè)器的兼容性。



01

UV檢測(cè)器


在樣品的檢測(cè)波長(zhǎng)下,所選流動(dòng)相的吸光度最好是A<0.2AU,特別是在梯度洗脫中,較低的吸光度意味著能獲得更好的檢測(cè)精度和更好的結(jié)果。但是,在等度洗脫中吸光度稍高的溶劑也是可以接受的。選用紫外檢測(cè)波長(zhǎng)低于200nm的溶劑是很罕見(jiàn)的,除非是用于檢測(cè)那些在高于200nm波長(zhǎng)處吸光度低的物質(zhì)。

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因?yàn)樗诖笥诘扔?00nm波長(zhǎng)都無(wú)紫外吸收,所以含水流動(dòng)相的吸光度,等于純?nèi)軇┑奈舛瘸艘粤鲃?dòng)相B溶劑的體積分?jǐn)?shù)φ。例如,在215nm波長(zhǎng),當(dāng)B為以下各種不同溶劑時(shí),含有25%B溶劑的流動(dòng)相的吸收值A(chǔ)分別對(duì)應(yīng):乙腈,0.00AU;甲醇,0.09AU;脫氣甲醇,0.05AU;四氫呋喃,0.22AU;異丙醇,0.07AU。注意,脫氣甲醇降低了氧氣在純?nèi)軇┲械臐舛?,?dǎo)致在200~240nm波長(zhǎng)下,吸光度降低了接近1/3。當(dāng)用充氦氣的方法進(jìn)行流動(dòng)相脫氣后,由于溶劑中氧氣含量的比例下降,流動(dòng)相中的B溶劑吸光值也會(huì)降低。氧氣在低極性溶劑(如四氫呋喃和異丙醇)中溶解度更高,因此,在實(shí)踐當(dāng)中,低極性溶劑的吸光值可能會(huì)比理論值更高。(理論值見(jiàn)<液相色譜方法開(kāi)發(fā)中紫外吸收波長(zhǎng)的選擇>)

水在波長(zhǎng)≥200nm時(shí)無(wú)吸收,這是假定水是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格純化的。HPLC級(jí)水在ASTM D1193中有詳細(xì)說(shuō)明。在低波長(zhǎng)中檢測(cè),有時(shí)不但會(huì)要求水中的總有機(jī)碳(TOC)低于50ppb,而且要有足夠高的電阻率。

02

RI檢測(cè)器


在等度洗脫中,流動(dòng)相的選擇通常不受RI檢測(cè)器的限制??赏ㄟ^(guò)選擇折光率跟樣品成分折光率有較大差異的流動(dòng)相,從而提高檢測(cè)靈敏度?;诓罘譁y(cè)量的檢測(cè)器(如:RI)不能用于梯度洗脫。因?yàn)橥ǔG闆r下A、B溶劑之間的響應(yīng)值相差很大。

03

MS檢測(cè)器


流動(dòng)相在MS接口蒸發(fā),流動(dòng)相一般由水、有機(jī)溶劑組成,揮發(fā)性添加劑的使用也很常見(jiàn)(添加劑不能是非揮發(fā)性緩沖劑或鹽)。因?yàn)橐呀?jīng)去除流動(dòng)相,所以在LC-MS中并不存在流動(dòng)相的紫外吸收,但是溶劑中不能有顆粒存在。


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