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新買的氨基柱,為啥沒有舊柱子好用呢?

更新時間:2023-10-09 點擊次數(shù):1285

新買的氨基柱,為啥沒有舊柱子好用呢?

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在色譜分析過程中大家可能發(fā)現(xiàn),對某些化合物而言,當(dāng)使用舊色譜柱時峰形和分離度都比較好,換新柱后會出現(xiàn)保留時間延長或拖尾問題。所謂柱子不一定新的好!越用越好用!"產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是:新色譜柱填料中有很多活性位點,對于您的樣品來說,柱子和樣品之間需要一段磨合期"

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新柱與樣品之間的磨合期"

一般解決方案:打底進樣,將新色譜柱填料中過多的活性位點占用。

具體操作:可連續(xù)進樣5針低濃度樣品,一針接一針進樣,不必等樣品峰出完再進下一針;或者直接進一針或幾針高濃度樣品,等待出峰穩(wěn)定之后再進行分析檢測。

這種操作方法,我們且稱之為新柱的飽和鈍化"。但這并不是萬能的處理方式。比如:氨基柱。

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氨基柱常用于糖類分析檢測,在新柱使用初期同樣會出現(xiàn)峰保留增強和峰拖尾的問題,對分析的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性存在較大影響。而因分析物性質(zhì)影響,打底進樣難以達到吸附平衡,對活性位點的占位屏蔽作用不明顯,分析物仍易拖尾,如下圖:

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月旭Ultimate® HILIC NH2,5μm

新柱對某糖分析譜圖-處理前


對此我們考慮三乙胺常用作掃尾劑以屏蔽填料中殘余硅醇基對分析物產(chǎn)生的次級吸附作用,氨丙基鍵合相新色譜柱也可使用TEA進行預(yù)處理。以0.5%三乙胺(用磷酸調(diào)pH2.5~3.0):乙腈(3070)為流動相,0.5~1mL/min過渡沖柱30~60min,再使用分析所需流動相充分平衡后進樣。在此條件下,三乙胺極易與殘余硅醇基形成氫鍵,起到占位屏蔽作用且能夠快速達到吸附平衡,解決了新色譜柱對分析物因次級吸附造成的峰保留增強與峰拖尾問題。色譜柱處理后譜圖如下:

image.png

月旭Ultimate® HILIC NH2,5μm

新柱對某糖分析譜圖-處理后

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月旭Ultimate® XB-NH2,3μm

新柱對某糖分析譜圖-處理后


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